１． ８種類の肺がん細胞株のDKK1とCKAP4の発現を確認したところ、A549とCalu-1細胞において両タンパク質を高発現していました（CKAP4は細胞膜受容体として機能するために、細胞膜に存在していることを確認しました）。A549とCalu-1細胞の培養上清中のエクソソーム分画にCKAP4が検出されました。これらの細胞においてエクソソームの生合成に関与するクラスリンやRab27、VPS35をノックダウンすると、CKAP4の細胞外への放出が減少しました。さらに、CKAP4を細胞膜に発現していないNCI-H292細胞にCKAP4を過剰発現させる（NCI-H292/CKAP4細胞）と、CKAP4が細胞膜に発現し、エクソソームとともに分泌されました。従って、肺がん細胞においても膵がん細胞と同様に、CKAP4がエクソソームとともに分泌されることが明らかになりました。

２． 大阪大学医学系研究科 新谷康教授、森井英一教授、同保健学研究科 三善英知教授との共同研究により、肺がん手術症例92症例の組織標本におけるDKK1とCKAP4の発現を免疫組織学的に解析し、これらの発現と臨床病理学的所見との比較を行なうとともに、患者血清中のCKAP4値を、抗CKAP4抗体を用いたELISAで測定しました。その結果、DKK1とCKAP4の両タンパク質が共に高発現している症例は、どちらか一方のみが発現している症例または両者とも発現していない症例に比して有意に予後不良であり、また腫瘍サイズが大きく、深達度が深いという結果でした。さらに、患者血清中のCKAP4値と、年齢並びに性別をマッチさせた92名の健常人血清のCKAP4値を比較したところ、血清CKAP4値が陽性 (0.1 ng/ml以上) の症例は、肺がん患者で19.6％、健常人で6.5％でした。また、免疫組織学的にCKAP4陽性の症例では24.3％が血清CKAP4値陽性であったのに対して、CKAP4陰性の症例では4.5％が血清CKAP4値陽性でした。また8症例において術前術後での血清CKAP4値を測定したところ、全症例で術後に血清CKAP4値が減少していました。従って、血清CKAP4値は、肺がん病変におけるCKAP4の発現を反映していると考えられました。

３． CKAP4は細胞質領域のシステイン残基がパルミチン酸化を受け、パルミチン酸を介して細胞膜の脂質ラフトに局在しています。パルミチン酸化されるシステインをセリンに変異したCKAP4はパルミチン酸化されず、本CKAP4変異体の細胞外への分泌量が減少しました。MACS(Magnetic activated cell sorting system)を用いた小胞輸送解析により、パルミチン酸化の有無によりCKAP4は多胞体からライソゾームまたは細胞膜へ輸送されるかが決定されることが判明しました。すなわち、非パルミチン酸化CKAP4はライソゾームへ積極的に輸送されることから、エクソソームとともに細胞外へ放出されるCKAP4が減少することが明らかになりました。

４． NCI-H292細胞にCKAP4を過剰発現させる（NCI-H292/CKAP4細胞）と、AKT活性が上昇し、in vivoとin vitro実験系での細胞増殖能が亢進しました。NCI-H292/CKAP4細胞のin vivoとin vitro実験系での細胞増殖能はそれぞれ抗CKAP4抗体の投与により抑制されました。また、NCI-H292/CKAP4細胞を移植したマウスの血清中にCKAP4が検出され、同マウスへの抗CKAP4抗体治療により、血清CKAP4は消失しました。

５.　アジア人において肺腺がん患者の約50％にEGF受容体(EGFR)変異が認められ、これまでにEGFRチロシンキナーゼ活性阻害剤(TKI)が開発されてきました。現在、第3世代EGFR-TKIであるオシメルチニブが開発されていますが、一定期間で耐性を生じることが問題となっています。EGFR変異を有する5種類の肺がん細胞株のDKK1とCKAP4の発現を確認したところ、HCC-4006細胞ではDKK1とCKAP4の両タンパク質が高発現していました。HCC-4006細胞に対して、抗CKAP4抗体ならびにオシメルチニブは単剤でAKT活性、vivoとin vitro実験系での細胞増殖能を阻害しました。さらに、両薬剤を併用することにより、その阻害効果が相乗的に増加しました。